細胞培養(yǎng)步驟:

一、準備工作:

* 清潔和消 毒所有工作臺面、工具和培養(yǎng)容器,通常使用70%酒精擦拭。

* 穿戴適當的實驗室防護裝備,如實驗服、套和口罩。

二、培養(yǎng)基的制備:

* 根據所需細胞類型,配制適宜的培養(yǎng)基,這通常包括基礎培養(yǎng)基、血清、抗生 素和其他生長因子。

* 確保所有培養(yǎng)基成分均為無菌, 并在37°C、5% CO?的恒溫箱中預熱。

三、細胞傳代:

* 從現(xiàn)有細胞培養(yǎng)中取出一部分細胞,通常使用胰蛋白酶-EDTA溶液消化細胞。

* 將消化后的細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)瓶中,加入適量的培養(yǎng)基,以稀釋細胞并促進其生長。

四、培養(yǎng)細胞:

* 將含有細胞的培養(yǎng)瓶放入恒溫箱中,維持適宜的溫度、濕度和CO?濃度。

* 定期觀察細胞生長情況,使用倒置顯微鏡檢查細胞形態(tài)和密度。

五、細胞收獲:

* 當細胞達到適當的生長密度時,再次使用胰蛋白酶EDTA溶液消化細胞。

* 收集細胞懸液,并通過離心分離細胞。

六、細胞計數和種植:

* 使用細胞計數板或自動細胞計數器計算細胞數量。

* 根據實驗需要,將細胞種植到新的培養(yǎng)容器中。

七、細胞凍存:

* 如果需要長期保存細胞,可以在細胞生長至對數生長期時進行凍存。

* 將細胞與凍存保護劑混合,緩慢冷卻至-80°C ,然后轉移到液氮罐中保存。

八、質量控制:

* 定期進行細胞株的鑒定,以確保其身份和純度。

* 檢測細胞培養(yǎng)中的微生物污染,如細 菌、真 菌和病毒。

九、廢棄物處理:

* 所有使用過的培養(yǎng)基、細胞懸液和其他廢棄物都應按照生物危險廢物處理規(guī)定進行處置。

* 請注意,這些步驟是通用的,并可能需要根據特定細胞類型、實驗目的和實驗室條件進行調整。在進行細胞培養(yǎng)時,應嚴格遵守無菌操作規(guī)程,以避免污染。此外,對于特定的細胞類型,可能還需要額外的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基配方。